生物掃描電子顯微鏡（SEM）
樣品要求
送樣方式：
可接收固定好的細(xì)胞/組織樣品并附有詳細(xì)送檢要求的送樣單
①需要您提供的樣品：收集細(xì)胞/組織取樣（新鮮迅速取材），置于1.5ml離心管內(nèi)，加入2.5%的戊二醛溶液（固定液加滿離心管，使樣品完全浸沒在固定液中），放置于4℃保存，請不要倒棄固定液，一般固定12h后可寄送（務(wù)必采用1.5ml離心管寄送）。
②打印填寫完整的預(yù)約單、送樣單和樣品一起寄送。
樣品取材及固定常用方法：
細(xì)胞類 | 106以上的細(xì)胞，用細(xì)胞刮刀刮下來，1500-3000轉(zhuǎn)離心，5-10min，收集細(xì)胞于1.5ml或2ml離心管，管底肉眼可見2-3粒大米狀樣品，如果細(xì)胞量很多，把細(xì)胞團(tuán)塊用細(xì)針尖挑成幾個(gè)小團(tuán)塊，棄上清，沿管壁緩慢加入4℃預(yù)冷的固定液，固定液完全浸沒樣品，可放置于4°C保存。 |
組織類 | 新鮮取材，取材位置準(zhǔn)確，組織大小盡量在1-2mm3，離體取材后請盡快投入4℃預(yù)冷的固定液中，固定液完全浸沒組織，可放置于4°C保存。 |
細(xì)菌類 | 吸取OD0.5-0.8的培養(yǎng)物，離心后棄培養(yǎng)基，收集菌體沉淀于管底黃豆大小，可以用PBS洗1-2次，齊上清，沿管壁緩慢加入4℃預(yù)冷的固定液，固定液完全浸沒樣品，可放置于4°C保存。 |
*固定液的量請參考上圖，加至箭頭所示位置 | |
*如樣品取材及固定有疑問請及時(shí)與云測加工作人員溝通 | |
服務(wù)周期：
一般為樣品接收后的2周左右，如遇法定假期需要順延，具體實(shí)驗(yàn)周期及送樣時(shí)間請與云測加工作人員溝通確認(rèn)，謝謝！
交付內(nèi)容：
每樣提供8張拍攝圖片（不提供分析服務(wù)），如需照片數(shù)量超過8張將產(chǎn)生額外費(fèi)用；
結(jié)果反饋請?jiān)跍y試完成一周內(nèi)，不建議回收樣品，如有需要請?zhí)崆胺答伣o云測加工作人員。
常見問題
1. 2.5%戊二醛固定液如何配置？
市售25%戊二醛水溶液 10ml
0.2M磷酸鹽緩沖液（pH7.0） 50ml
蒸餾水加至 100ml
2. 0.2M，pH7.0磷酸緩沖液的配置方法？
A液：Na2HPO4·H2O 31.61g，或者Na2HPO4·7H2O 53.63g，或者Na2HPO4·12H2O 71.64g，加蒸餾水至1000ml
B液：NaH2PO4·H2O 27.6g，或者NaH2PO4·2H2O 31.21g，加蒸餾水至1000ml
0.2M，pH7.0磷酸緩沖液= A液61ml+B液39ml（合起來是100ml）
3. 為什么要加固定液？
固定液是為了保持細(xì)胞、組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)。
4. 掃描電鏡制樣流程？
新鮮取材后用2.5%戊二醛固定液固定樣本，4℃過夜放置，倒掉2.5%戊二醛固定液，用0.1M，pH7.0的磷酸緩沖液漂洗樣品三次，每次15min；用1%的鋨酸溶液固定樣品1-2h；小心取出鋨酸廢液，用0.1M，pH7.0的磷酸緩沖液漂洗樣品三次，每次15min；用梯度濃度（包括30%，50%，70%，80%，90%和95%五種濃度）的乙醇溶液對樣品進(jìn)行脫水處理，每種濃度處理15min，再用100%的乙醇處理兩次，每次20 min。用乙醇與醋酸異戊酯的混合液（V/V=1/1）處理樣品30min，再用純醋酸異戊酯處理樣品1h或放置過夜。臨界點(diǎn)干燥。鍍膜，觀察。處理好的樣品在掃描電鏡中觀察。
