透射電鏡

透射電子顯微鏡（Transmission Electron Microscope ,簡稱TEM），可以看到光學(xué)顯微鏡下無法看清的小于0.2um的細(xì)微結(jié)構(gòu)，這些結(jié)構(gòu)稱為亞顯微結(jié)構(gòu)或超微結(jié)構(gòu)。要想看清這些結(jié)構(gòu)，就必須選擇波長更短的光源，以提高顯微鏡的分辨率。1932年Ruska發(fā)明了以電子束為光源的透射電子顯微鏡，電子束的波長要比可見光和紫外光短得多，并且電子束的波長與發(fā)射電子束的電壓平方根成反比，也就是說電壓越高波長越短。目前TEM的分辨力可達(dá)0.2nm。

掃描電鏡（SEM）和透射電鏡（TEM）的區(qū)別：

高分辨的透射電子顯微鏡常用于觀察普通顯微鏡不能分辨的細(xì)致物質(zhì)結(jié)構(gòu)，掃描電子顯微鏡主要用于觀察固體表面的形鏡。有時，將兩者有機(jī)結(jié)合可以得到比較全面的材料分析結(jié)果。下面將從多方面比較，細(xì)致掃描電鏡和透射電鏡的區(qū)別。

透射電鏡

晶體結(jié)構(gòu)可以通過高分辨率透射電子顯微鏡來研究，這種技術(shù)也被稱為相襯顯微技術(shù)。當(dāng)使用場發(fā)射電子源的時候，觀測圖像通過由電子與樣品相互作用導(dǎo)致的電子波相位的差別重構(gòu)得出，然而由于圖像還依賴于射在屏幕上的電子的數(shù)量，對相襯圖像的識別更加復(fù)雜。

非晶樣品透射電子顯微圖像襯度是由于樣品不同微區(qū)間存在的原子序數(shù)或厚度的差異而形成得到，即質(zhì)量厚度襯度，也叫質(zhì)厚襯度。質(zhì)厚襯度適用于對復(fù)型膜試樣電子圖象作出解釋。質(zhì)量厚度數(shù)值較大的，對電子的吸收散射作用強(qiáng)，使電子散射到光欄以外的要多，對應(yīng)較安的襯度。質(zhì)量厚度數(shù)值小的，對應(yīng)較亮的襯度。

1.腦組織取材及應(yīng)用

腦組織取材法：在一般情況下，腦組織先進(jìn)行灌注固定（4%多聚甲醛溶液），待固定完成后應(yīng)馬上打開顱骨，暴露出所要取材的位置，根據(jù)取材的要求以及實(shí)驗(yàn)?zāi)康母钊∠鄳?yīng)的部位，如研究腦神經(jīng)軸索、髓鞘以及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，建議取材于腦組織白質(zhì)部分，此處有髓神經(jīng)纖維相對較多，膠質(zhì)細(xì)胞比較非富；如要研究神經(jīng)元以及血腦屏障結(jié)構(gòu)，建議取材于腦皮質(zhì)的灰質(zhì)部分，而且最好做定向包埋，以神經(jīng)元長軸方向（大約為腦組織的矢狀面）作為切面方向，這樣可以很好的觀察神經(jīng)元細(xì)胞核、軸突以及樹突結(jié)構(gòu)的變化，突觸以及毛細(xì)血管的結(jié)構(gòu)也比較容易見到。

圖：暴露于AgNP的動物腦組織的代表性TEM顯微照片RER（箭頭）和擴(kuò)大的高爾基體復(fù)合體（G）的腫脹碎片。

圖：自噬抑制劑對腦組織的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)具有保護(hù)作用。采用透射電子顯微京（TEM）觀察小鼠腦組織亞腦細(xì)胞結(jié)構(gòu)的病理變化。在JEV+Rapa和JEV組觀察到腦組織線粒體嚴(yán)重?fù)p傷，在JEV+Wort和JEV+CQ組觀察到腦組織線粒體輕微損傷（紅色箭頭，線粒體；比例尺，2um）

2.睪丸及附睪組織取材及應(yīng)用

睪丸及附睪組織取材方法：由于睪丸組織比較松散，固定難度較大，目前大多采取灌注固定法進(jìn)行固定，但此方法如果處理不當(dāng)，很可能會造成固定不良，原因是睪丸的血供離心臟比較遠(yuǎn)，固定液難以到達(dá)，睪丸曲細(xì)精管基膜比較厚，固定液難以滲透，導(dǎo)致固定不良。我們還可以采用注射固定法即用注射針直接插入睪丸內(nèi)部，從多個方向進(jìn)行注射固定液，然后割取觀察部位進(jìn)行進(jìn)一步浸泡固定；另一種方法就是直接割取觀察部位進(jìn)行浸泡固定的，需要注意的是，取材的睪丸組織必須切的很細(xì)，讓固定液直接滲透入曲精細(xì)管的斷面，這樣，各層生殖細(xì)胞都會得到很好的固定，不過比較麻煩的就是每次操作的都要離心處理。另外需要注意的是，要觀察生精細(xì)胞，必須取材于睪丸的睪丸網(wǎng)部位，如果取材于直精小管部位，就看不到生精細(xì)胞了，大鼠與小鼠睪丸網(wǎng)比較表淺，就在白膜下附近。如果要觀察成熟精子，最好取材于附睪的尾部，此處精子已基本成熟，而且精子密度最高。

圖：附睪Prm1缺陷精子染色質(zhì)濃縮和ROS誘導(dǎo)的DNA損傷分析。（A）Prm1+/+、和Prm1-/-附睪精子的代表性透射電子顯微照片。（B）來自Prm1+/+、Prm1+/-和Prm1-/-雄性（n=3）的附睪精子DNA濃縮的定量；對每名男子100個精子進(jìn)行了分析。（C）Prm1-/-附睪精子的透射電子顯微照片。（D）載有從Prm1+/-、Prm1-/-、Prm2+/-、Prm2-/-和通過電泳分離的WT雄性附睪精子分離的基因組DNA的瓊脂糖凝膠。載有梯子（L）的其他車道已從圖像中剪下。（E）8-OHdG陽性精子在Prm1+/+、+Prm1+/-、Prm1-/-，小鼠（n=3）的附睪頭和尾部組織切片上的百分比。（F）來自Prm1+/+、Prm1+/-、Prm1-/-雄性的睪丸、附睪頭和附睪尾組織切片中針對8-OHdG的代表性IF染色。

3.骨組織取材及應(yīng)用

腎外包被一層薄膜，主要由纖維組織和少量平滑肌組成。一般腎標(biāo)本取材部位在腎實(shí)質(zhì)，實(shí)質(zhì)由皮質(zhì)與髓質(zhì)兩部分組成，一般取材部分在腎皮質(zhì)，皮質(zhì)位于腎的外周，其厚度因動物種類不同而有差異，一般在1mm-4mm。腎組織除了采取灌注固定外，直接浸泡固定的效果也是比較滿意。腎組織取材相對比較簡單，一般臨床上采用穿刺術(shù)，然后根據(jù)需要切取皮質(zhì)或髓質(zhì)進(jìn)行觀察。

圖：BSHX減輕腎臟的組織病理學(xué)和超微結(jié)構(gòu)病理學(xué)。（A）腎臟外觀和大小的初步觀察。（B）腎臟的蘇木精和伊紅（HE）染色（X400）。（C）高碘酸希夫（PAS）腎臟染色（x400）。（D）腎臟透射電子顯微鏡（比例尺，2um）。（E）腎臟透射電子顯微鏡（比例尺，500nm）。