產(chǎn)品屬性

概述

本試劑盒適用于克隆帶有3’ 末端A突出的PCR產(chǎn)物的克隆。如Taq DNA聚合酶、Tth DNA聚合酶等擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物在3’末端后都帶有一個(gè)突出的堿基A，這樣的PCR產(chǎn)物可以用3’末端后帶有一個(gè)突出堿基T的載體方便地進(jìn)行克隆。 為了獲得快速高效的連接效果，本試劑盒采用了一種特殊的高活力Rapid Ligation Buffer，確保在短時(shí)間內(nèi)可以獲得很好的連接效果。獨(dú)特連接系統(tǒng)允許用戶在10分鐘的時(shí)間里完成連接反應(yīng)。連接產(chǎn)物可以用M13通用引物和T7啟動(dòng)子引物對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。pUCmT含有T7 RNA聚合酶的啟動(dòng)子，可以對(duì)插入片段進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄。

特點(diǎn)

• 為了獲得快速高效的連接效果，本試劑盒采用了一種特殊的高活力Rapid Ligation Buffer，確保在短時(shí)間內(nèi)可以獲得很好的連接效果。獨(dú)特連接系統(tǒng)允許用戶在10分鐘的時(shí)間里完成連接反應(yīng)。連接產(chǎn)物可以用M13通用引物和T7啟動(dòng)子引物對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。pUCm-T含有T7 RNA聚合酶的啟動(dòng)子，可以對(duì)插入片段進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄。

應(yīng)用

帶A末端PCR產(chǎn)物的快速連接反應(yīng)的建立

使用說(shuō)明

1. PCR產(chǎn)物3’末端帶有突出的A堿基：Taq、Tth、AmpliTaq、KlenTaq DNA聚合酶擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物3’末端均帶有突出的A堿基。建議擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行回收，再進(jìn)行連接轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，可以使用生工產(chǎn)品柱式DNA膠回收試劑盒（B518131/8132）。如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物特異性很高，可直接使用生工產(chǎn)品柱式PCR產(chǎn)物純化試劑盒（B518145/8146）純化PCR產(chǎn)物。 2. PCR產(chǎn)物3’末端沒(méi)有突出的A堿基：Pfu、Pwo、Tli或DeepVent 等DNA聚合酶具有3’~5’外切酶活性，其擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物末端可能不帶有3’ A，要對(duì)這種平末端PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆，應(yīng)先對(duì)其進(jìn)行3’末端加A，再進(jìn)行連接轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。建議選用生工產(chǎn)品dA-Tailing Kit （B522291/2292）進(jìn)行加Ａ實(shí)驗(yàn)。 3. 自備試劑：SOC培養(yǎng)基、IPTG、X-gal等。