
生物組織切片
樣品要求
一、石蠟切片
常規(guī)包埋塊大小規(guī)格1cm*1cm、2cm*2cm;包埋塊厚度一般為0.5-0.7 cm;石蠟切片的厚度范圍3-20 μm。
1、動(dòng)物組織-各類(lèi)臟器
a.組織需要被固定液固定24小時(shí)以上;組織固定時(shí)間盡量不要超過(guò)一周,組織彈性增加,易碎;
b.寄送過(guò)程送樣容器要能夠完全容納組織,組織不能蜷縮,固定液要完全淹沒(méi)組織;
c.漂浮的組織可以使用抽真空或者棉球、濾紙將組織壓在液體內(nèi)。
d.腦組織需要客戶自行進(jìn)行灌流處理,灌流后固定送樣,有需求觀察特殊腦區(qū),建議自行取材到特征位置;
c.動(dòng)物腸道切片請(qǐng)?zhí)幚砗媚c道內(nèi)容物;
2.植物組織
a.參考動(dòng)物送樣1-3要求;
b.可以剪得稍微大一點(diǎn)1-2厘米的莖,葉片取1*1的大小,一個(gè)管子里可以多放兩個(gè)(同一個(gè)植物),植物表面簡(jiǎn)單清水沖洗,無(wú)臟污泥土;
c.硬植物組織建議70%FAA,軟植物組織建議50%FAA。
d.橫縱切需求:葉片類(lèi)縱切切為平行葉脈,橫切為垂直葉脈;根莖類(lèi)橫切為圓柱狀,縱切為長(zhǎng)條狀。
二、冰凍切片
冰凍包埋塊大小為直徑2.5厘米的圓形;包埋塊厚度一般為0.5-1 cm;切片的厚度范圍6-200 μm。
1、動(dòng)物組織-常規(guī)染色
固定液固定寄送要求同石蠟切片;
2.動(dòng)物組織-熒光拍攝
a.根據(jù)樣本熒光淬滅程度,淬滅慢,固定液固定低溫寄送;
b.熒光淬滅快,-80凍存后,干冰寄送(寄送過(guò)程請(qǐng)盡量保持樣本形態(tài))。
常見(jiàn)問(wèn)題
1. 樣本固定時(shí)間超過(guò)48小時(shí)了,還能做染色嗎?
樣本固定超過(guò)48小時(shí),也是可以做常規(guī)染色的。固定時(shí)間較長(zhǎng),組織易脆、易碎,著色效果不如固定時(shí)間短的組織。
2. 樣本提供多少?
常規(guī)大小鼠動(dòng)物組織提供一部分或者完整臟器都是可以的,技術(shù)老師會(huì)根據(jù)實(shí)際情況對(duì)組織進(jìn)行修塊,包埋組織厚度約為1-2 mm,大小根據(jù)臟器面積確定取材。請(qǐng)參考上面樣品要求。
3. 冰凍切片的樣本怎么處理?
冰凍切片同石蠟切片,4%多聚甲醛固定送樣即可。若組織內(nèi)本身帶有熒光切極易淬滅,建議4%多聚甲醛避光固定送樣或者避光低溫-20~-90℃寄送。低溫寄送存在組織內(nèi)冰晶融化破壞組織原有形態(tài)的風(fēng)險(xiǎn)。