組織免疫熒光技術(shù)
預(yù)約次數(shù)
398次
服務(wù)周期
樣品要求
1、若使用熒光標記的一抗，則孵育完成后，1xPBS 清洗 3 次每次 5 min，直接進行染核和封片。
2、為了長期保存，請在 4℃ 下避光保存樣品。
3、若無抗熒光猝滅封片劑，則滴加一滴 1xPBS 后覆以蓋玻片，置于顯微鏡下觀察拍照，另外，注意避免長時間照射樣品，防止熒光過快猝滅。
4、注意調(diào)整抗體的稀釋比例，盡量按照實驗室已摸索的稀釋比例、抗體說明書以及文獻中比例配制。
5、若想同時檢測多種抗原，則需選擇種屬來源與樣本組織不同的抗體，按抗體各自的說明書推薦終濃度混合后滴加至組織上進行孵育；二抗也按各自稀釋比例混合后進行孵育，注意各熒光二抗波長需不同。
6、拍照時注意調(diào)節(jié)光強及曝光時間等參數(shù)。
需求模板
常見問題
1、組織細胞無著色：可能實驗操作問題，包括實驗操作不當、實驗材料異常、抗體選擇和抗體質(zhì)量問題等，或者本身蛋白不表達，這些均可通過設(shè)置陽性對照以及陰性對照實驗來排除。
2、 染色過淺：可能由于封閉時間過長，抗體濃度過低，抗體孵育溫度不當或時間過短，操作過程中緩沖液殘留過多或者間接稀釋抗體濃度；應(yīng)根據(jù)具體原因進行調(diào)整。
3、染色過深：可能由于封閉時間過短，抗體濃度過高，抗體孵育時間過長，洗滌不充分（洗滌次數(shù)少或時間短），或者濾光片選擇不合適；應(yīng)根據(jù)具體原因進行調(diào)整。
